T-cell receptor Vβ repertoire of CD8+ T-lymphocyte subpopulations in cutaneous leishmaniasis patients from the state of Rio de Janeiro, Brazil

In human cutaneous leishmaniasis (CL), the immune response is mainly mediated by T-cells. The role of CD8⁺ T-lymphocytes, which are related to healing or deleterious functions, in affecting clinical outcome is controversial. The aim of this study was to evaluate T-cell receptor diversity in late-differentiated effector (LDE) and memory CD8⁺ T-cell subsets in order to create a profile of specific clones engaged in deleterious or protective CL immune responses. Healthy subjects, patients with active disease (PAD) and clinically cured patients were enrolled in the study. Total CD8⁺ T-lymphocytes showed a disturbance in the expression of the Vβ2, Vβ9, Vβ13.2, Vβ18 and Vβ23 families. The analyses of CD8⁺T-lymphocyte subsets showed high frequencies of LDE CD8⁺T-lymphocytes expressing Vβ12 and Vβ22 in PAD, as well as effector-memory CD8⁺ T-cells expressing Vβ22. We also observed low frequencies of effector and central-memory CD8⁺ T-cells expressing Vβ2 in PAD, which correlated with a greater lesion size. Particular Vβ expansions point to CD8⁺ T-cell clones that are selected during CL immune responses, suggesting that CD8⁺ T-lymphocytes expressing Vβ12 or Vβ22 are involved in a LDE response and that Vβ2 contractions in memory CD8⁺T-cells are associated with larger lesions.

Avaliação da citotoxidade na evolução para a cura clínica da leishmaniose tegumentar americana / Evaluation of cytotoxicity in the progression to clinical cure of American cutaneous leishmaniasis

A evolução clínica da leishmaniose tegumentar Americana (LTA) depende da espécie de Leishmania infectante e da resposta imune desencadeada pelo paciente. Nesta resposta, sabe-se que os linfócitos T CD8+ exercem importantes funções, através da liberação de citocinas pro-inflamatórias e de sua atividade citotóxica, e têm sido relacionados tanto a um papel na proteção imunológica e regressão da lesão, quanto na manutenção da infecção e dano tecidual. Outras populações celulares, como as células natural killer (NK), células natural killer-T (NKT) e linfócitos T CD4+ citotóxicos também são capazes de exercer atividades similares aos linfócitos T CD8+, entretanto pouco é conhecido a respeito da função citotóxica destas células na imunopatogenia da LTA. Assim, na tentativa de melhor compreender o papel da citotoxicidade na evolução para a cura clínica na LTA, o objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência e a atividade citotóxica destas populações celulares, através de imunofenotipagem e avaliação da expressão de CD107a, em amostras obtidas de sangue periférico de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) e leishmaniose mucosa (LM) ativa; durante e após o tratamento antimonial. As análises celulares foram realizadas após descongelamento das amostras, com o intuito de identificar as freqüências de tais populações e suas atividades citotóxicas. Foram ainda realizados ensaios in vitro, para determinar o comportamento citotóxico destas populações durante a resposta antigênica específica. Os resultados mostraram que a freqüência de linfócitos T CD8+ e T CD4+ foi baixa durante a forma ativa da LC, e, enquanto a frequência de linfócitos T CD8+ tendeu a retornar aos níveis de normalidade com o tratamento e a cura clínica, a freqüência de linfócitos T CD4+ permaneceu prejudicada. A função citotóxica dos linfócitos T CD8+, T CD4+ e células NKT foi mais notável nos pacientes durante o tratamento, indicando que suas funções citotóxicas, em conjunto com os efeitos benéficos da terapia, parecem auxiliar no direcionamento para a cura clínica da LC. Entretanto, estas mesmas células apresentaram atividade citotóxica prejudicada quando em contato com alta carga antigênica. As células NK e NKT foram detectadas em altos níveis nos pacientes de LC e não apresentaram tendência a retornar aos níveis de normalidade com a cura recente. Ainda, a citotoxicidade exercida pelas células NK circulantes não pareceu influenciar no processo de cura da LC. Embora a amostragem dos pacientes de LM tenha sido pequena, os resultados apontam para um uma baixa da frequência de linfócitos T CD8+ e T CD4+ nos pacientes de LM, enquanto as células NK e NKT apresentaram freqüências elevadas. A atividade citotóxica de linfócitos T CD8+, T CD4+ e células NK foi mais acentuada nos grupos de pacientes de LM que nos indivíduos sadios; porém, intrigantemente, nenhuma das populações celulares nestes pacientes foi capaz de exercer atividade citotóxica específica em resposta aos antígenos de L. (V.) braziliensis. Nas avaliações das subpopulações de células NK e NKT, a subpopulação NK CD56dim foi a mais prevalente e com atividade predominantemente citotóxica, independente da presença da patologia ou do tratamento. Já subpopulação NKT duplo-positiva (CD4+CD8+) parece desempenhar um importante papel citotóxico no processo de cura clínica da leishmaniose cutânea. Em conjunto, estes dados apontam para uma participação efetiva dos linfócitos T CD8+ e das células NKT (principalmente a subpopulação duplo-positiva) no processo de cura da LC, enaltecendo a importância destas células como promissores alvos de estudos terapêuticos e vacinais.